Avaliação da teratogenicidade e toxicidade em peixe-zebra (danio- rerio) do extrato bruto rico em carotenoides de melão cantaloupe (cucumis melo l.) e nanonoencapsulado em gelatina

Cantaloupe melon has an orange pulp rich in carotenoids, which can promote several beneficial effects on human health. However, carotenoids are extremely unstable in the presence of oxygen, light, and heat, which may reduce their bioactive properties. In this context, nanoencapsulation is an exce...

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Detalhes bibliográficos
Autor principal: Pais, Tatiana dos Santos
Outros Autores: Morais, Ana Heloneida de Araújo
Formato: Dissertação
Idioma:pt_BR
Publicado em: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Assuntos:
Endereço do item:https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/55890
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Pais, Tatiana dos Santos
Avaliação da teratogenicidade e toxicidade em peixe-zebra (danio- rerio) do extrato bruto rico em carotenoides de melão cantaloupe (cucumis melo l.) e nanonoencapsulado em gelatina
description Cantaloupe melon has an orange pulp rich in carotenoids, which can promote several beneficial effects on human health. However, carotenoids are extremely unstable in the presence of oxygen, light, and heat, which may reduce their bioactive properties. In this context, nanoencapsulation is an excellent strategy to ensure the preservation and enhancement of bioactive effects. On the other hand, one of the major current concerns is related to the toxicity effects of these nanoparticles. Therefore, this study aimed to evaluate the teratogenicity of the crude extract rich in carotenoids from Cantaloupe melon (CE) and of the porcine gelatin-based nanoparticles containing CE (EPG) in an animal model of zebrafish (Danio rerio). The CE was obtained from Cantaloupe melon (Cucumis melo L.) in processes that involved drying the melon pulp (55 ̊C/24 h) to obtain flour, maceration in ethanol (1:4 w/v) and partition in hexane (1:1 v/v). The nanoparticles were obtained using the oil-in-water (O/W) emulsification technique. For the characterization of nanoparticles in terms of morphology, chemical interactions, particle size and encapsulation efficiency, Scanning Electron Microscopy (SEM), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), Laser Diffraction and Incorporation Efficiency (IE) analyses were carried out, respectively. In the experiments in an animal model with zebrafish, for the embryotoxicity test, the 308 embryos, divided into seven groups, were exposed to concentrations of 12.5 mg/L and 50.0 mg/L of CE and EPG during 96 hours post fertilization (hpf) and seven days post fertilization (dpf) the optomotor test was performed. In the toxicity tests with adult zebrafish, the 60 fish were divided into six groups exposed to 12.5 mg/L and 50.0 mg/L of CE and EPG for 96 hours, and then submitted to light/dark neurotoxicity, new and social tank. Based on the characterization results, EPG showed an IE of 94% (4.04), a smooth surface without depressions, a diameter of 88.7 nm (7.02), and a polydispersion index of 0.41 (0.03). FTIR evidenced the emergence of new vibrational bands in EPG compared to CE, demonstrating new chemical interactions. In animal model experiments, no anomalies were observed after exposure to 96 hpf, in the groups treated with CE and EPG, and heartbeats remained between 132 and 138 rpm within the expected range for embryos, similar to the negative control and DMSO groups. The groups that received CE and EPG did not show significant morphological alterations. The mortality level was below 20%, revealing neither an embryotoxic nor teratogenic character for CE and EPG in the concentrations used. There was a significant improvement in the visual motor response of larvae exposed to CE and EPG, which can be attributed to the antioxidant power and vitamin A precursor of carotenoids. No adverse effects were identified on the behavior of adults, all were similar to the behavior of the control group, without signs of anxiety, stress, or changes in swimming, speed or sociability that would indicate any toxicity. Therefore, it was found that CE and EPG maintained characteristics found in previous studies, proving the method's reproducibility. There were no signs of teratogenicity, cardiotoxicity, or neurotoxicity in the larvae, and both CE and EPG improved cognitive function and response in the evaluated model. Adult fish showed no signs of anxiety or any other evidence of toxicity, showing that CE and EPG are potentially safe.
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In this context, nanoencapsulation is an excellent strategy to ensure the preservation and enhancement of bioactive effects. On the other hand, one of the major current concerns is related to the toxicity effects of these nanoparticles. Therefore, this study aimed to evaluate the teratogenicity of the crude extract rich in carotenoids from Cantaloupe melon (CE) and of the porcine gelatin-based nanoparticles containing CE (EPG) in an animal model of zebrafish (Danio rerio). The CE was obtained from Cantaloupe melon (Cucumis melo L.) in processes that involved drying the melon pulp (55 ̊C/24 h) to obtain flour, maceration in ethanol (1:4 w/v) and partition in hexane (1:1 v/v). The nanoparticles were obtained using the oil-in-water (O/W) emulsification technique. For the characterization of nanoparticles in terms of morphology, chemical interactions, particle size and encapsulation efficiency, Scanning Electron Microscopy (SEM), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), Laser Diffraction and Incorporation Efficiency (IE) analyses were carried out, respectively. In the experiments in an animal model with zebrafish, for the embryotoxicity test, the 308 embryos, divided into seven groups, were exposed to concentrations of 12.5 mg/L and 50.0 mg/L of CE and EPG during 96 hours post fertilization (hpf) and seven days post fertilization (dpf) the optomotor test was performed. In the toxicity tests with adult zebrafish, the 60 fish were divided into six groups exposed to 12.5 mg/L and 50.0 mg/L of CE and EPG for 96 hours, and then submitted to light/dark neurotoxicity, new and social tank. Based on the characterization results, EPG showed an IE of 94% (4.04), a smooth surface without depressions, a diameter of 88.7 nm (7.02), and a polydispersion index of 0.41 (0.03). FTIR evidenced the emergence of new vibrational bands in EPG compared to CE, demonstrating new chemical interactions. In animal model experiments, no anomalies were observed after exposure to 96 hpf, in the groups treated with CE and EPG, and heartbeats remained between 132 and 138 rpm within the expected range for embryos, similar to the negative control and DMSO groups. The groups that received CE and EPG did not show significant morphological alterations. The mortality level was below 20%, revealing neither an embryotoxic nor teratogenic character for CE and EPG in the concentrations used. There was a significant improvement in the visual motor response of larvae exposed to CE and EPG, which can be attributed to the antioxidant power and vitamin A precursor of carotenoids. No adverse effects were identified on the behavior of adults, all were similar to the behavior of the control group, without signs of anxiety, stress, or changes in swimming, speed or sociability that would indicate any toxicity. Therefore, it was found that CE and EPG maintained characteristics found in previous studies, proving the method's reproducibility. There were no signs of teratogenicity, cardiotoxicity, or neurotoxicity in the larvae, and both CE and EPG improved cognitive function and response in the evaluated model. Adult fish showed no signs of anxiety or any other evidence of toxicity, showing that CE and EPG are potentially safe. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O melão Cantaloupe apresenta uma polpa alaranjada rica em carotenoides, os quais podem promover diversos efeitos benéficos à saúde humana. Contudo, os carotenoides são extremamente instáveis a presença de oxigênio, luz, e ao calor, podendo ocasionar a redução das propriedades bioativas. Nesse contexto, a nanoencapsulação se apresenta como uma excelente estratégia para garantir a preservação e potencialização dos efeitos bioativos. Por outro lado, uma das grandes preocupações atuais está relacionada aos efeitos de toxicidade dessas nanopartículas. Com isso, o objetivo desse estudo foi avaliar a toxicidade e teratogenicidade do extrato bruto rico em carotenoides do melão Cantaloupe (EB) e das nanopartículas a base de gelatina suína contendo EB (EGS) em modelo animal de peixe-zebra (Danio rerio). O EB foi obtido a partir do melão Cantaloupe (Cucumis melo L.) em processos que envolveram secagem da polpa de melão (55 ̊C/24 h) para a obtenção de farinha, maceração em etanol (1:4 p/v), e partição em hexano (1:1 v/v). As nanopartículas foram obtidas por meio da técnica de emulsificação óleo em água (O/A). Para a caracterização das nanopartículas quanto a morfologia, interações químicas, tamanho de partículas e eficiência de encapsulamento, foram realizadas análises de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), Difração a Laser e Eficiência de Incorporação (EI), respectivamente. Nos experimentos em modelo animal com peixezebra, para o teste de embriotoxicidade, os 308 embriões, distribuídos em 7 grupos foram expostos a concentrações de 12,5 mg/L e 50,0 mg/L de EB e EGS durante 96 horas pós fertilização (hpf) e com 7 dias pós fertilização (dpf) foi realizado o teste optomotor. Nos testes de toxicidade com peixe-zebra adultos, os 60 peixes foram distribuídos em seis grupos e expostos a concentrações de 12,5 mg/L e 50,0 mg/L de EB e EGS durante 96 horas, e então submetidos as análises de neurotoxicidade claro/escuro, tanque novo e social. Com base nos resultados de caracterização, EGS apresentou EI de 94% (4,04), superfície lisa, sem depressões, diâmetro de 88,7 nm (7,02) e índice de polidispersão de 0,41 (0,03). O FTIR evidenciou o surgimento de novas bandas vibracionais em EGS em comparação com EB, demonstrando novas interações químicas. Nos experimentos em modelo animal, após exposição por 96 hpf, não foram observadas anomalias nos grupos tratados com EB e EGS, e os batimentos cardíacos se mantiveram entre 132 e 138 rpm dentro do esperado para embriões, semelhante aos grupos controle negativo e DMSO. Os grupos que receberam EB e EGS não apresentaram alterações morfológicas significativas. O nível de mortalidade se apresentou abaixo de 20% revelando não haver um caráter embriotóxico e nem teratogênico para EB e EGS nas concentrações utilizadas. Houve uma melhora significativa (p = 0,01) na resposta visual motora das larvas exposta ao EB e EGS que pode ser atribuída ao poder antioxidante e precursor de vitamina A dos carotenoides. Não foram identificados efeitos adversos no comportamento dos adultos, todos foram similares ao comportamento do grupo controle, sem sinais de ansiedade, estresse, nem alterações no nado, velocidade, sociabilidade que indicassem qualquer tipo de toxicidade. Portanto, foi constatado que EB e EGS mantiveram características encontradas em estudos anteriores comprovando a reprodutibilidade do método, não houve sinais de teratogenicidade, cardiotoxicidade ou neurotoxicidade nas larvas e tanto EB quanto EGS melhoraram a função cognitiva e de resposta no modelo avaliado. Os peixes adultos não apresentaram sinais de ansiedade ou qualquer outro indício de toxicidade evidenciando que EB e EGS são potencialmente seguros. 2023-12-13T19:30:11Z 2023-12-13T19:30:11Z 2023-09-14 masterThesis PAIS, Tatiana dos Santos. Avaliação da teratogenicidade e toxicidade em peixe-zebra (danio- rerio) do extrato bruto rico em carotenoides de melão cantaloupe (cucumis melo l.) e nanonoencapsulado em gelatina. Orientadora: Dra. Ana Heloneida de Araújo Morais. 2023. 70f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica e Biologia Molecular) - Centro de Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2023. https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/55890 pt_BR Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Rio Grande do Norte Brasil UFRN PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR