Efeito do pH sobre a estabilidade da atividade antitríptica do inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo nanoencapsulado

Trypsin inhibitor (ITT) isolated from tamarind seed (Tamarindus indica L.) nanocapsulated in chitosan and isolated whey protein (EQPI) potentiated the effect of ITT in terms of antitryptic activity, and pH is a characteristic that may affect the efficiency and release of the particle. In order to be...

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Detalhes bibliográficos
Autor principal: Silva, Eloyse Mikaelly de Souza
Outros Autores: Morais, Ana Heloneida de Araújo
Formato: bachelorThesis
Idioma:pt_BR
Publicado em: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Assuntos:
Inibidores de proteases
Protease inhibitors
Nanopartículas
Nanoparticles
Tamarindus
Técnicas in Vitro
In vitro techniques
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::NUTRICAO::BIOQUIMICA DA NUTRICAO
Endereço do item:https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/50405
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Silva, Eloyse Mikaelly de Souza
Efeito do pH sobre a estabilidade da atividade antitríptica do inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo nanoencapsulado
description Trypsin inhibitor (ITT) isolated from tamarind seed (Tamarindus indica L.) nanocapsulated in chitosan and isolated whey protein (EQPI) potentiated the effect of ITT in terms of antitryptic activity, and pH is a characteristic that may affect the efficiency and release of the particle. In order to better understand the properties of EQPI and the factors that may affect its action, this study investigated the effect of pH on the stability of antitryptic activity of EQPI compared to ITT. ITT was extracted from tamarind seeds, isolated by CNBr-activated trypsin-Sepharose 4B affinity chromatography, and characterized for antitryptic activity, protein quantification, and molecular mass. The nanoparticles were obtained by the technique of nanoprecipitation in organic solvent using chitosan (QP) and isolated whey protein (PI) as encapsulant in the ratio 1:2:2 (w/w) and then characterized for their morphology by scanning electron microscopy (SEM) and the efficiency of incorporation of ITT determined by the antitryptic activity of EQPI. To evaluate the effect of pH on the stability of the encapsulated inhibitor activity, the nanoparticles and ITT were exposed to different pH conditions (3.0 and 7.0) simulating digestion conditions. The behavior of EQPI and ITT exposed to the pH conditions was monitored by antitryptic activity using ITT (1.4 mg/mL), EQPI (7.0 mg/mL), and ITT (ITText) extracted from EQPI (7.0 mg/mL) as controls without passing through the pH conditions. As a result, it was found that the isolated ITT had an antitryptic activity of 98.56% (533.03 IU) and a molecular mass of about 20 kDa. The nanocapsulated ITT exhibited a spherical and smooth morphology, had an encapsulation efficiency (EE) of 95.57 % and showed no antitryptic activity. However, when ITText was exposed to active release conditions, it showed 98.21% antitryptic activity. Under oral, gastric and intestinal pH conditions, the percentage of inhibition of EQPI was 0% (2 min), 44.07% (2 hr) and 20.10% (2 hr), respectively, while for ITT it was 92.27%, 94.11% and 94.06%. It can be concluded that the ITT was isolated and protected during nanocapsulation, which ensures gradual release at specific sites of the gastrointestinal tract. Considering the stability of antitryptic activity at pH 7.0 and release at pH 3.0, EQPI represents an interesting particle for application in pharmaceutical products, considering the bioactivities already attributed to ITT and its action in the gastrointestinal tract.
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In order to better understand the properties of EQPI and the factors that may affect its action, this study investigated the effect of pH on the stability of antitryptic activity of EQPI compared to ITT. ITT was extracted from tamarind seeds, isolated by CNBr-activated trypsin-Sepharose 4B affinity chromatography, and characterized for antitryptic activity, protein quantification, and molecular mass. The nanoparticles were obtained by the technique of nanoprecipitation in organic solvent using chitosan (QP) and isolated whey protein (PI) as encapsulant in the ratio 1:2:2 (w/w) and then characterized for their morphology by scanning electron microscopy (SEM) and the efficiency of incorporation of ITT determined by the antitryptic activity of EQPI. To evaluate the effect of pH on the stability of the encapsulated inhibitor activity, the nanoparticles and ITT were exposed to different pH conditions (3.0 and 7.0) simulating digestion conditions. The behavior of EQPI and ITT exposed to the pH conditions was monitored by antitryptic activity using ITT (1.4 mg/mL), EQPI (7.0 mg/mL), and ITT (ITText) extracted from EQPI (7.0 mg/mL) as controls without passing through the pH conditions. As a result, it was found that the isolated ITT had an antitryptic activity of 98.56% (533.03 IU) and a molecular mass of about 20 kDa. The nanocapsulated ITT exhibited a spherical and smooth morphology, had an encapsulation efficiency (EE) of 95.57 % and showed no antitryptic activity. However, when ITText was exposed to active release conditions, it showed 98.21% antitryptic activity. Under oral, gastric and intestinal pH conditions, the percentage of inhibition of EQPI was 0% (2 min), 44.07% (2 hr) and 20.10% (2 hr), respectively, while for ITT it was 92.27%, 94.11% and 94.06%. It can be concluded that the ITT was isolated and protected during nanocapsulation, which ensures gradual release at specific sites of the gastrointestinal tract. Considering the stability of antitryptic activity at pH 7.0 and release at pH 3.0, EQPI represents an interesting particle for application in pharmaceutical products, considering the bioactivities already attributed to ITT and its action in the gastrointestinal tract. PIBIC AF UFRN (IC) O inibidor de tripsina isolado das sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITT) nanoencapsulado em quitosana e proteína isolada do soro do leite (EQPI) tem potencializado os efeitos do ITT em relação à atividade antitríptica e o pH é uma característica que pode influenciar na eficiência e na liberação da partícula. Diante disso, visando uma melhor compreensão sobre as características do EQPI e fatores que podem interferir na sua ação, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do pH sobre a estabilidade da atividade antitríptica do EQPI comparada ao ITT. O ITT foi extraído das sementes de tamarindo, isolado por cromatografia de afinidade Tripsina-Sepharose 4B CNBr-ativada e caracterizado quanto a atividade antitríptica, quantificação proteíca e massa molecular. As nanopartículas foram obtidas por meio da técnica de nanoprecipitação em solvente orgânico, utilizando como agentes encapsulantes a quitosana (QP) e proteína isolada do soro do leite (PI) na proporção 1:2:2 p/p e, em seguida, foram caracterizadas quanto à morfologia por meio da Microscopia eletrônica de varredura (MEV) e eficiência da incorporação das do ITT determinada pela atividade antitríptica do EQPI. Para a avaliação da influência do pH na estabilidade da atividade do inibidor encapsulado as nanopartículas e o ITT foram submetidos a diferentes condições de pH (3,0 e 7,0), simulando as condições de digestão. O comportamento do EQPI e ITT, expostos às condições de pH, foi monitorado conforme atividade antitríptica, utilizando-se como controles, sem passar pelas exposições de pH, ITT (1,4 mg/mL), EQPI (7,0 mg/mL) e ITT extraído de EQPI (ITText) (7,0 mg/mL). Como resultado, foi observado que o ITT isolado apresentou 98,56% (533,03 UI) de atividade antitríptica e massa molecular de aproximadamente 20kDa. O ITT nanoencapsulado apresentou aspecto morfológico globoso, esférico e liso, 95,57% de eficiência de encapsulação (EE) e não apresentou atividade antitríptica. Contudo, quando exposto a condições de liberação do ativo o ITText, apresentou 98,21% de atividade antitríptica. Nas condições de pH da oral, gástrica e intestinal, os percentuais de inibição de EQPI foram, respectivamente, de 0% (2 min.), 44,07% (2h) e 20,10% (2h), enquanto para ITT foram de 92,27%, 94,11% e 94,06%. Portanto, conclui-se que o ITT foi isolado e, ao ser nanoencapsulado, apresentou-se protegido o que garante uma liberação gradual em locais específicos do TGI. Considerando a estabilidade da atividade antitríptica frente ao pH 7,0 e liberação no pH 3,0, o EQPI se apresenta como uma partícula interessante para aplicação em produtos farmacêuticos, considerando as bioatividades já atribuídas ao ITT e por sua ação no trato gastrointestinal. 2022-12-21T18:01:05Z 2022-12-21T18:01:05Z 2022-12-01 bachelorThesis SILVA, Eloyse Mikaelly de Souza. Efeito do pH sobre a estabilidade da atividade antitríptica do inibidor de tripsina isolado das sementes de tamarindo nanoencapsulado. 2022. 41 f. Trabalho de Conclusão de Curso (graduação) - Departamento de Nutrição, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, RN, 2022. https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/50405 pt_BR Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ application/pdf Universidade Federal do Rio Grande do Norte Brasil UFRN Nutrição Departamento de Nutrição

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