Avaliação da atividade biológica de células-tronco da polpa dental humana submetidas ao laser de baixa intensidade

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The low-level laser therapy (LLLT) has been used in order to improve wound healing and tissue regeneration. The literature shows a positive effect of LLLT on cell proliferation, but little is known about its effectiveness on the proliferation of dental pulp stem cells. The aim of this study was to e...

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Detalhes bibliográficos
Autor principal: Araújo, Ivana Maria Zaccara Cunha
Outros Autores: Barbosa, Carlos Augusto Galvão
Formato: Dissertação
Idioma:pt_BR
Publicado em: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Assuntos:
Lasers
Células-tronco
Polpa Dentária
CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::SAUDE COLETIVA
Endereço do item:https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27481
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Araújo, Ivana Maria Zaccara Cunha
Avaliação da atividade biológica de células-tronco da polpa dental humana submetidas ao laser de baixa intensidade
description The low-level laser therapy (LLLT) has been used in order to improve wound healing and tissue regeneration. The literature shows a positive effect of LLLT on cell proliferation, but little is known about its effectiveness on the proliferation of dental pulp stem cells. The aim of this study was to evaluate the effect of irradiation LLLT on biological activity of dental pulp stem cells from permanent teeth (DPSCs). Dental pulp extracts were isolated from healthy five third molars removed by surgical and/or orthodontic indication. After enzymatic digestion, the cells were examined and cultured in αMEM supplemented with antibiotics and 15% fetal bovine serum. On the third subculture, the cells were either irradiated with a laser diode InGaAlP, using two different energy densities (0.5 J/cm2 - 16 seconds and 1.0 J / cm ² - 33 seconds), wavelength of 660nm and power of 30mW. A new irradiation using the same parameters was performed 48 hours after the first. A control group (non-irradiated) was kept under the same experimental conditions of culture. Cell proliferation was evaluated by Trypan blue exclusion method and by measuring mitochondrial activity using the MTT-based cytotoxicity assay, at intervals of 24, 48, 72 and 96 h after the first laser application. Events of the cell cycle were evaluated in the same intervals, and the events related to cell death were analyzed by flow cytometry in the ranges of 24 to 72 hours. Data from cell counts were submitted to non-parametric Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test, considering a confidence interval of 95%. The results showed that the both groups irradiated exhibited an upward cell proliferation curve, with statistically significant difference (p < 0.05) compared to the control group in intervals of 72 and 96 hours. No significant changes were observed in cell viability throughout the experiment. The distribution of the cells in the cell cycle phases was consistent with proliferating cells in all three groups. The results of growth curve, MTT, Anexin/PI and cell cycle were concordant, then it is possible conclude that the LLLI, especially with the dose of 1,0J/cm2, it is a therapy of great importance for the future of tissue engineering and regenerative medicine involving stem cells, once in this study it contributed to the growth and viability of DPSCs.
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After enzymatic digestion, the cells were examined and cultured in αMEM supplemented with antibiotics and 15% fetal bovine serum. On the third subculture, the cells were either irradiated with a laser diode InGaAlP, using two different energy densities (0.5 J/cm2 - 16 seconds and 1.0 J / cm ² - 33 seconds), wavelength of 660nm and power of 30mW. A new irradiation using the same parameters was performed 48 hours after the first. A control group (non-irradiated) was kept under the same experimental conditions of culture. Cell proliferation was evaluated by Trypan blue exclusion method and by measuring mitochondrial activity using the MTT-based cytotoxicity assay, at intervals of 24, 48, 72 and 96 h after the first laser application. Events of the cell cycle were evaluated in the same intervals, and the events related to cell death were analyzed by flow cytometry in the ranges of 24 to 72 hours. Data from cell counts were submitted to non-parametric Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test, considering a confidence interval of 95%. The results showed that the both groups irradiated exhibited an upward cell proliferation curve, with statistically significant difference (p < 0.05) compared to the control group in intervals of 72 and 96 hours. No significant changes were observed in cell viability throughout the experiment. The distribution of the cells in the cell cycle phases was consistent with proliferating cells in all three groups. The results of growth curve, MTT, Anexin/PI and cell cycle were concordant, then it is possible conclude that the LLLI, especially with the dose of 1,0J/cm2, it is a therapy of great importance for the future of tissue engineering and regenerative medicine involving stem cells, once in this study it contributed to the growth and viability of DPSCs. O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido utilizado com a finalidade de promover cicatrização e regeneração dos tecidos. A literatura mostra um efeito positivo do LBI na proliferação celular, porém pouco se sabe sobre a sua eficácia na proliferação de células-tronco dentais. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da irradiação do LBI na atividade biológica de células-tronco da polpa de dente permanente (DPSCs). Extratos de polpa dental foram isolados de cinco terceiros molares hígidos removidos por indicação cirúrgica e/ou ortodôntica. Após a digestão enzimática, as células foram caracterizadas e cultivadas em meio de cultura αMEM suplementado com antibióticos e 15% de soro fetal bovino. No terceiro subcultivo, as células foram irradiadas com um laser diodo InGaAlP, utilizando-se duas diferentes densidades de energia (0,5 J/cm2 - 16 segundos e 1,0 J/cm² - 33 segundos), comprimento de onda de 660nm e potência de 30mW. Uma nova irradiação, utilizando os mesmos parâmetros, foi realizada 48 h após a primeira. Um grupo controle (não irradiado) foi mantido nas mesmas condições experimentais de cultivo. A fim de avaliar a proliferação celular, foram utilizados o método exclusão por Azul de Tripan e a viabilidade celular medida através do ensaio de MTT, nos intervalos de 24, 48, 72 e 96 h após a primeira aplicação do laser. Nos mesmos intervalos foram avaliados os eventos do ciclo celular. Eventos relacionados à morte celular foram analisados por citometria de fluxo nos intervalos de 24 e 72 horas. Os dados das contagens celulares foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando um intervalo de confiança de 95%. Os resultados mostraram que os dois grupos irradiados exibiram uma curva de proliferação mais ascendente, com diferença estatisticamente significante (p<0,05) em relação ao grupo controle nos intervalos de 72 e 96h, sem alterações consideráveis na viabilidade celular ao longo do experimento. A distribuição das células nas fases do ciclo celular foi coerente com células em proliferação nos três grupos. Os resultados da curva de crescimento, MTT, Anexina/PI e Ciclo celular foram concordantes, dessa forma é possível concluir que o LLLI, principalmente com dose de 1,0J/cm2 , seja uma terapia de grande importância para o futuro da engenharia tecidual e medicina regenerativa envolvendo DPSCs, uma vez que neste estudo o LLLI contribuiu com o crescimento e viabilidade celular. 2019-08-09T12:27:09Z 2019-08-09T12:27:09Z 2013-12-18 masterThesis ARAÚJO, Ivana Maria Zaccara Cunha. Atividade biológica de células-tronco da polpa dental humana submetida à irradiação laser de baixa intensidade. 2013. 77f. Dissertação (Mestrado em Saúde Coletiva) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2013. https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27481 pt_BR application/pdf Universidade Federal do Rio Grande do Norte Brasil UFRN Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva Centro De Ciências Da Saúde

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