Sinalização por Sonic Hedgehog influencia a proliferação e diferenciação de progenitores gliais in vivo.
O Sonic Hedgehog (Shh) é uma proteína essencial durante o desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Há uma vasta literatura apresentando suas funções e efeitos sobre a proliferação de células em diferentes estágios do desenvolvimento embrionário. No entanto, a função desta proteína sobre pop...
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| Formato: | conferenceObject |
| Idioma: | por |
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| Endereço do item: | https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/24379 |
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| Resumo: | O Sonic Hedgehog (Shh) é uma proteína essencial durante o desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Há uma vasta literatura apresentando suas funções e efeitos sobre a proliferação de células em diferentes estágios do desenvolvimento embrionário. No entanto, a função desta proteína sobre populações celulares específicas ainda está pouco elucidada. O presente trabalho demonstra a influencia do Shh sobre as célulastronco neurais e, mais restritamente, sobre a população glial presente no córtex cerebral em desenvolvimento.
Objetivos
O objetivo principal consiste em avaliar a influência da via de sinalização por Shh sobre a proliferação e diferenciação de
progenitores gliais na substância branca e substância cinzenta de roedores. Manipulamos essa via através de injeções intraperitoneais de agonistas e antagonistas do Shh em fêmeas grávidas em diferentes períodos da gestação. Os efeitos do aumento ou redução da sinalização por Shh sobre essa população foram avaliados quantitativamente no período pósnatal.
Métodos
Fêmeas grávidas da linhagem de camundongos C57bl/6 receberam injeção de Purmorfamina, um agonista da via de Shh, por 3 dias sendo estes o 12°, 13° e 14° dia embrionário. No 13° dia as fêmeas também foram injetadas com 5bromo2' deoxyuridine (BrdU), incorporado apenas por células progenitoras na fase S do ciclo celular. A prole foi avaliada no dia pós natal 7 (P7). Para o bloqueio da via do Shh utilizamos a injeção de Ciclopamina no dias embrionários 16°, 17° e 18° sendo o Brdu administrado no 17° dia. Os animais também foram sacrificados para a análise em P7. Para a imunohistoquímica, foram utilizados anticorpos contra marcadores de população de progenitores/ células gliais como o Oligodendrocyte transcription
factor (Olig2) e o Glial fibrillary acidic protein (GFAP). Além disso, a marcação para BrdU também foi evidenciada, permitindo a análise de colocalização desses marcadores. Foram adquiridas imagens dos cortes histológicos no microscópio confocal (Examiner Z.1, Zeiss). Foram analisadas duas áreas, a substância branca periventricular, a substância cinzenta imediatamente acima dessa, correspondente ao córtex motor primário. Análises estatísticas foram realizadas com o programa Prism 5 (GraphPad). Para a comparação de dois grupos (controle x experimental) foi realizado teste t não pareado. O intervalo de confiança desse estudo é de 95%. Todos os procedimentos realizados estão de acordo com as leis da Sociendade de Biologia Experimental para experimentação em animais e foram previamente aprovados pelo comitê de ética
da instituição envolvida sob o parecer número 040/2014.
Resultados e Conclusões
O tratamento com Purmorfamina leva a um aumento do número de células comarcadas para BrdU e Olig2 na substância branca: Controle: Média ± SEM: 3.067 ± 0.4595 N=3 Purmorfamina: Média ± SEM: 7.293 ± 0.8668 N=2. Já na substância cinzenta não foi observada diferença estatística entre os grupos: Controle: Média ± SEM: 2.720 ± 0.6958 N=3 Purmorfamina: Média ± SEM: 3.596 ± 0.5382 N=2 Os animais tratados com Ciclopamina ainda estão em processo de análise. Com o aumento da sinalização por Shh em período anterior a gliogênese, podemos observar um maior número de progenitores gliais em processo mitótico, localizados na substância branca do cérebro de roedores. Com isso, podemos concluir que a sinalização por Shh promovida pela administração da Purmorfamina durante a gestação, leva a uma maior especificação glial em períodos precoces do desenvolvimento do SNC. |
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