Modulação da expressão da proteína XPA em resposta ao tratamento com azul de metileno fotossensibilizado

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Reactive oxygen species (ROS) are produced by aerobic metabolism and react with biomolecules, such as lipids, proteins and DNA. In high concentration, they lead to oxidative stress. Among ROS, singlet oxygen (1O2) is one of the main ROS involved in oxidative stress and is one of the most reactive f...

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Detalhes bibliográficos
Autor principal: Silva, Acarizia Eduardo da
Outros Autores: Lima, Lucymara Fassarela Agnez
Formato: Dissertação
Idioma:por
Publicado em: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
Assuntos:
Estresse oxidativo
Azul de metileno
Oxigênio singlete
Reparo de DNA
XPA
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
Endereço do item:https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/12567
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Silva, Acarizia Eduardo da
Modulação da expressão da proteína XPA em resposta ao tratamento com azul de metileno fotossensibilizado
description Reactive oxygen species (ROS) are produced by aerobic metabolism and react with biomolecules, such as lipids, proteins and DNA. In high concentration, they lead to oxidative stress. Among ROS, singlet oxygen (1O2) is one of the main ROS involved in oxidative stress and is one of the most reactive forms of molecular oxygen. The exposure of some dyes, such as methylene blue (MB) to light (MB+VL), is able to generate 1O2 and it is the principle involved in photodynamic therapy (PDT). 1O2 e other ROS have caused toxic and carcinogenic effects and have been associated with ageing, neurodegenerative diseases and cancer. Oxidative DNA damage is mainly repaired by base excision repair (BER) pathway. However, recent studies have observed the involvement of nucleotide excision repair (NER) factors in the repair of this type of injury. One of these factors is the Xeroderma Pigmentosum Complementation Group A (XPA) protein, which acts with other proteins in DNA damage recognition and in the recruitment of other repair factors. Moreover, oxidative agents such as 1O2 can induce gene expression. In this context, this study aimed at evaluating the response of XPA-deficient cells after treatment with photosensitized MB. For this purpose, we analyzed the cell viability and occurrence of oxidative DNA damage in cells lines proficient and deficient in XPA after treatment with MB+VL, and evaluated the expression of this enzyme in proficient and complemented cells. Our results indicate an increased resistance to treatment of complemented cells and a higher level of oxidative damage in the deficient cell lines. Furthermore, the treatment was able to modulate the XPA expression up to 24 hours later. These results indicate a direct evidence for the involvement of NER enzymes in the repair of oxidative damage. Besides, a better understanding of the effects of PDT on the induction of gene expression could be provided
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The exposure of some dyes, such as methylene blue (MB) to light (MB+VL), is able to generate 1O2 and it is the principle involved in photodynamic therapy (PDT). 1O2 e other ROS have caused toxic and carcinogenic effects and have been associated with ageing, neurodegenerative diseases and cancer. Oxidative DNA damage is mainly repaired by base excision repair (BER) pathway. However, recent studies have observed the involvement of nucleotide excision repair (NER) factors in the repair of this type of injury. One of these factors is the Xeroderma Pigmentosum Complementation Group A (XPA) protein, which acts with other proteins in DNA damage recognition and in the recruitment of other repair factors. Moreover, oxidative agents such as 1O2 can induce gene expression. In this context, this study aimed at evaluating the response of XPA-deficient cells after treatment with photosensitized MB. For this purpose, we analyzed the cell viability and occurrence of oxidative DNA damage in cells lines proficient and deficient in XPA after treatment with MB+VL, and evaluated the expression of this enzyme in proficient and complemented cells. Our results indicate an increased resistance to treatment of complemented cells and a higher level of oxidative damage in the deficient cell lines. Furthermore, the treatment was able to modulate the XPA expression up to 24 hours later. These results indicate a direct evidence for the involvement of NER enzymes in the repair of oxidative damage. Besides, a better understanding of the effects of PDT on the induction of gene expression could be provided Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Espécies reativas de oxigênio (ERO) são produzidas durante o metabolismo aeróbico e são capazes de reagir com diversas biomoléculas, como lipídios, proteínas e DNA. Dentre as ERO, o oxigênio singlete (1O2) e conhecido como um dos principais agentes envolvidos no estresse oxidativo. A exposição de alguns pigmentos, como o azul de metileno (MB) a luz e capaz de gerar 1O2, sendo essa a base da terapia fotodinâmica (TFD). Quando em excesso, o 1O2 e outras ERRO mostram efeitos tóxicos e carcinogênicos e estão relacionados ao envelhecimento e a etiologia de varias doenças, incluindo artrite, doenças degenerativas e câncer. A principal via de reparo de danos oxidativos ao DNA e a via por excisão de base (BER). No entanto, estudos recentes tem observado a atuação de fatores da via de reparo por excisao de nucleotideo (NER) na correção desse tipo de lesão. Um dos fatores da via NER e a proteína Xeroderma Pigmentoso do Grupo de complementação A (XPA), que atua em conjunto com outras proteínas na etapa de localização dos sítios de danos e de recrutamento de outros fatores de reparo. Ainda, agentes oxidativos como o 1O2 sao capazes de induzir a expressão gênica. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a resposta de células deficientes em XPA ao tratamento com MB fotossensibilizado. Para isso, foram analisadas a viabilidade celular e a ocorrência de danos oxidativos em linhagens proficientes e deficientes em XPA, assim como a expressão dessa enzima em células proficientes e complementadas. Nossos resultados indicam um aumento da resistência ao tratamento em células complementadas com XPA e um maior nível de danos oxidativos em linhagens deficientes nessa enzima. Alem disso, o tratamento foi responsável pela modulação da expressão dessa enzima ate 24h depois. Esses resultados indicam uma evidencia direta da participação de enzimas do NER no reparo de danos oxidativos e contribui para um melhor entendimento sobre os efeitos da TFD na indução da expressão gênica 2014-12-17T14:03:34Z 2010-11-30 2014-12-17T14:03:34Z 2010-10-06 masterThesis SILVA, Acarizia Eduardo da. Modulação da expressão da proteína XPA em resposta ao tratamento com azul de metileno fotossensibilizado. 2010. 120 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica; Biologia Molecular) - Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2010. https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/12567 por Acesso Embargado application/pdf application/pdf application/pdf Universidade Federal do Rio Grande do Norte BR UFRN Programa de Pós-Graduação em Bioquímica Bioquímica; Biologia Molecular

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