Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression

Objetivo: Culturas primárias de hepatócitos humanos sáo comuns em sistemas in vitro para estudar o metabolismo hepático de xenobióticos. No entanto, as fontes de tecidos humanos saudáveis como doadores de hepatócitos sáo muito limitados. No presente estudo, objetivam...

ver descrição completa

Na minha lista:
Detalhes bibliográficos
Principais autores: Liu, Cong, Bezerra, Jorge Adbon
Formato: Online
Idioma:por
Publicado em: FEDERAL UNIVERSITY OF RIO GRANDE DO NORTE, BRAZIL
Endereço do item:https://periodicos.ufrn.br/jscr/article/view/1422
Tags: Adicionar Tag
Sem tags, seja o primeiro a adicionar uma tag!
id oai:periodicos.ufrn.br:article-1422
record_format ojs
spelling oai:periodicos.ufrn.br:article-14222019-06-05T23:31:36Z Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression Liu, Cong Bezerra, Jorge Adbon Objetivo: Culturas primárias de hepatócitos humanos sáo comuns em sistemas in vitro para estudar o metabolismo hepático de xenobióticos. No entanto, as fontes de tecidos humanos saudáveis como doadores de hepatócitos sáo muito limitados. No presente estudo, objetivamos desenvolver um sistema reversível para facilitar a auto-regeneraçáo dos hepatócitos primários, mantendo a capacidade de restauraçáo da funçáo diferenciada. Nossa hipótese foi que a remoçáo temporal dos SV40T dos hepatócitos transformado renovava a expressáo de funções metabólicas altamente especializadas. Métodos: Foram gerados retrovírus recombinantes com LoxP-ladeado SV40T sinalizados com EGFP (RetroSV40T) e adenovírus com a expressáo de Cre-recombinase sinalizadas com DsRed (AdCreDsRed). Os vírus foram usados seqüencialmente para condicionalmente transformar hepatócitos murinos e humanos in vitro. Resultados: A infecçáo com RetroSV40T transformou tanto hepatócitos murinos quanto humanos. A expressáo de EGFP facilitou a monitorizaçáo das células infectadas e isolamento de clones de células transformadas. A expressáo de SV40T resultou em uma reduçáo generalizada na expressáo dos genes CYP por clones transformados de hepatócitos humanos. A infecçáo de um desses clones com AdCreDsRed excisou SV40T e EGFP e expressou eficientemente DsRed para identificar células em reversáo. A análise da expressáo gênica em células infectadas com os adenovírus revelou plena restauraçáo da expressáo de CYP3A4 RNAm e recuperaçáo da expressáo parcial de CYP2C9 e CYP2D6. Conclusáo: A infecçáo sequencial dos hepatócitos primários com RetroSV40T e AdCreDsRed gera células com capacidade de auto-regeneraçáo, com o potencial para restaurar a expressáo gênica diferencial sobre a excisáo de SV40T pela Cre-recombinase. FEDERAL UNIVERSITY OF RIO GRANDE DO NORTE, BRAZIL 2011-12-15 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf https://periodicos.ufrn.br/jscr/article/view/1422 JOURNAL OF SURGICAL AND CLINICAL RESEARCH; Vol. 2 No. 1 (2011); 15-32 JOURNAL OF SURGICAL AND CLINICAL RESEARCH; v. 2 n. 1 (2011); 15-32 2179-7889 por https://periodicos.ufrn.br/jscr/article/view/1422/1112 Copyright (c) 2014 JOURNAL OF SURGICAL AND CLINICAL RESEARCH
institution Periódicos UFRN
collection Portal de Pediódicos Eletrônicos da UFRN
language por
format Online
author Liu, Cong
Bezerra, Jorge Adbon
spellingShingle Liu, Cong
Bezerra, Jorge Adbon
Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
author_facet Liu, Cong
Bezerra, Jorge Adbon
author_sort Liu, Cong
title Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
title_short Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
title_full Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
title_fullStr Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
title_full_unstemmed Conditional removal of SV40T from transformed primary human hepatocytes recovers selective CYP gene expression
title_sort conditional removal of sv40t from transformed primary human hepatocytes recovers selective cyp gene expression
description Objetivo: Culturas primárias de hepatócitos humanos sáo comuns em sistemas in vitro para estudar o metabolismo hepático de xenobióticos. No entanto, as fontes de tecidos humanos saudáveis como doadores de hepatócitos sáo muito limitados. No presente estudo, objetivamos desenvolver um sistema reversível para facilitar a auto-regeneraçáo dos hepatócitos primários, mantendo a capacidade de restauraçáo da funçáo diferenciada. Nossa hipótese foi que a remoçáo temporal dos SV40T dos hepatócitos transformado renovava a expressáo de funções metabólicas altamente especializadas. Métodos: Foram gerados retrovírus recombinantes com LoxP-ladeado SV40T sinalizados com EGFP (RetroSV40T) e adenovírus com a expressáo de Cre-recombinase sinalizadas com DsRed (AdCreDsRed). Os vírus foram usados seqüencialmente para condicionalmente transformar hepatócitos murinos e humanos in vitro. Resultados: A infecçáo com RetroSV40T transformou tanto hepatócitos murinos quanto humanos. A expressáo de EGFP facilitou a monitorizaçáo das células infectadas e isolamento de clones de células transformadas. A expressáo de SV40T resultou em uma reduçáo generalizada na expressáo dos genes CYP por clones transformados de hepatócitos humanos. A infecçáo de um desses clones com AdCreDsRed excisou SV40T e EGFP e expressou eficientemente DsRed para identificar células em reversáo. A análise da expressáo gênica em células infectadas com os adenovírus revelou plena restauraçáo da expressáo de CYP3A4 RNAm e recuperaçáo da expressáo parcial de CYP2C9 e CYP2D6. Conclusáo: A infecçáo sequencial dos hepatócitos primários com RetroSV40T e AdCreDsRed gera células com capacidade de auto-regeneraçáo, com o potencial para restaurar a expressáo gênica diferencial sobre a excisáo de SV40T pela Cre-recombinase.
publisher FEDERAL UNIVERSITY OF RIO GRANDE DO NORTE, BRAZIL
publishDate 2011
url https://periodicos.ufrn.br/jscr/article/view/1422
work_keys_str_mv AT liucong conditionalremovalofsv40tfromtransformedprimaryhumanhepatocytesrecoversselectivecypgeneexpression
AT bezerrajorgeadbon conditionalremovalofsv40tfromtransformedprimaryhumanhepatocytesrecoversselectivecypgeneexpression
_version_ 1766682127777136640

Registros relacionados