Papel de fucana extraída da alga Spatoglossum schoroederi em modelo experimental de inflamação/
Abstract: Fucana are sulfated polysaccharides, with anti-viral, anti-proliferative, anti-inflammatory, anti-coagulant activity, among others. Since there are proposals of pharmaceutical drug development from fucans, this project's general objective was to research the action of a fucan purified...
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| Formato: | Dissertação |
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| Endereço do item: | https://app.bczm.ufrn.br/home/#/item/78816 |
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| Resumo: | Abstract: Fucana are sulfated polysaccharides, with anti-viral, anti-proliferative, anti-inflammatory, anti-coagulant activity, among others. Since there are proposals of pharmaceutical drug development from fucans, this project's general objective was to research the action of a fucan purified from the alga Spatoglossum schröederi over experimental model of inflammation. For this purpose, mutine macrophages were cultivated for 6 hours with different doses of fucan (100, 50, 10 and 1 µg/ml), in the presence or absence of 1 µg/ml LPS. Following this, RNA was extracted and expression of cytokines TNF, IL-1 and IL-12, and chemokines KC/CXCL1, MIP-2/CXCL2, MIP-1.../CCL3, MIP-1.../CCL4 and RANTES/CCL5, were determined by RT-PCR. Macrophages were also cultivated with fucan for 48 hours for determine the levels of nitric oxide (NO), by the Griess reaction. The results showed that 100 and 50 µg/ml of fucan were able to induce high levels of expression of all the cytokines and chemokines studied. However, when macrophages were co-cultivated with fucan and LPS was observed that this polysaccharide reduced this expression of the majority of these inflammatory mediators induced by LPS. Relative to NO production, no significant levels of nitrite were detected in the supernatant of macrophages cultivated with the different doses of fucan. Next was evaluated the effect this fucan over peritonitis induced by peptone (chemical irritant) or LPS (microbiologic agent). Fo this, mice were teatred with 500, 50 and 10 µg/animal of fucan by intravenous (iv) or subcutaneous (sc) rote and after 30 minutes were inoculated intraperitoneally (ip) with 10% peptone LPS (400 ng/mice). After 8 horas the peritoneal exudate was coleted and after cell count it was observed that the different doses of fucan innibited cell migration to the peritoneal cavity of mice. The effect of this fucan ever sepsis induced by cecal ligation (CLP) and puncture was also studied.#$&Resumo: Fucanas são polissacarídeos sulfatados com atividade anti-viral, anti-proliferativa, anti-inflamatória, anti-coagulante, entre outras. uma vez que existem propostas para o desenvolvimento de novos fármacos a partir de fucanas, o objetivo geral desse trabalho foi pesquisar a ação de uma fucana purificada da alga Spatoglossum schoederi em modelo experimental de inflamação. Assim sendo, macrófagos murinos foram cultivados durante 6 horas com diferentes doses de fucana (100, 50, 10 e 1 µg/ml) na presença ou não de 1 µg/ml de LPS. Em seguida, o RNA foi extraído e a expressão das citocinas TNF, IL-1 e IL-12 e quimiocinas KC/CXCL1, MIP-2/CXCL2, MCP-1/CCL2, MIP-1.../CCL3, MIP-1.../CCL4 e RANTES/CCL5, foi determinada por RT-PCR. Os macrófagos foram cultivados, ainda por 48 horas para determinação dos níveis de óxido nítrico (NO), pela reação de Griess. As doses de 100 e 50 µg/ml de fucana foram capazes de induzir uma forte expressão de todas as citocinas e quimiocinas pesquisadas. Entretanto, quando os macrófagos foram co-cultivados com a fucana e o LPS, foi observado que esse polissacarídeo reduziu a expressão da maioria desses mediadores inflamatórios pesquisados. Relativo à produção de NO, não foram detectados níveis significativos de nitrito nos sobrenadantes de macrófagos cultivados com as diferentes doses de fucana. Em seguida, foi avaliado o efeito dessa fucana sobre a peritonite induzida pela peptona (irritante químico) ou LPS (agente microbiológico). Para isso, os camundongos foram tratados com as doses de 500, 50 e 10 µg/animal de fucana pela rota intravenosa (iv) ou subcutânea (sc) e, após 30 minutos, foram inoculados intraperitonealmente (ip) com 1 ml de peptona a 10% ou LPS (400 ng/animal). Depois de 8 horas, realizou-se a contagem celular e foi observado que, em camundongos, as diferentes doses de fucana inibiram a migração celular para o peritônio.#$&Adicionalmente, também foi estudado o efeito dessa fucana sobre a sepse induzida por punção cecal. Assim sendo, camundongos foram tratados previamente com 500 µg/animal de fucana via iv ou sc. Em seguida, os animais foram submetidos a um processo cirúrgico a fim de induzir sepse letal. A sobrevivência dos animais foi registrada e observou-se redução na mortalidade dos animais tratados apenas com a fucana pela via sc. A partir de então, foi avaliada a ação da fucana no modelo de injúria pulmonar, que é uma consequência da sepse. Com esse intuito, os animais foram tratados com diferentes doses de fucana via iv e 30 minutos depois foram inoculados intranasalmente (in) com LPS (330 µg/kg). Após 8 horas, foi coletado sangue da cauda dos animais para análise celular, e realizado um lavado broncoalveolar para contagem de células, onde se observou que a fucana inibiu a migração dessas células para o pulmão com consequente neutrofilia sanguínea, nos animais tratados com o LPS in. Os resultados sugerem que essa fucana embora estimule a produção de citocinas pró-inflamatórias, inibe a ação do LPS nas células do sistema imune, reduz migração celular para sítios de inflamação e é capaz de inibir mortalidade de animais com sepse quando administrado pela rota sc.#$&Therefore mice were treated with fucan iv or sc with 500 µg/animal of fucan 30 minutes before CLP. The mice survival was determinate and was observed a reduction of mortality of the mice treated only with fucan by sc route. Therefore was evaluated the action of the fucan in model acute lung injury that is a consequence of sepsis. For this, mice were treated with different doses of fucan by iv route and 30 minutes later with LPS (300 mg/kg) intranasally (in). After eight hours one drop pf blood from the animals tail was collected to cellular analysis, and realized a bronchoalveolar lavage to count of cells. The results showed that the fucan inhibited cells migration to the lung, with consequent blood neutrophilia in the animals treated with LPS by in rote. The results suggest that this fucan in spite of stimulating the production of pro-inflammatory cytokines inhibits the action of LPS in the cells from immune system, decrease cellular migration to the inflamed site and is able of inhibiting mortality of animals with sepsis, when administred by sc, but not iv, route. |
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