Purificação e caracterização parcial de uma ß-N-acetilglucosaminidase de Artemia franciscana/
Utilizando diferentes substratos sintéticos (p-nitrofenis) derivados de açúcar) foram identificadas várias atividades enzimáticas em extratos protéicos de Artemia franciscana. Uma destas enzimas foi foco do nosso estudo, a ß-N-acetilglucosaminidase, a qual foi purificada 290 vezes for fracionamento...
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| Formato: | Dissertação |
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| Resumo: | Utilizando diferentes substratos sintéticos (p-nitrofenis) derivados de açúcar) foram identificadas várias atividades enzimáticas em extratos protéicos de Artemia franciscana. Uma destas enzimas foi foco do nosso estudo, a ß-N-acetilglucosaminidase, a qual foi purificada 290 vezes for fracionamento com sulfato de amônio, fracionamento com acetona, cromatografia em gel filtração (Bio Gel A 1.5m) e cromatografia de afinidade (quitina). A enzima apresentou uma recuperação final de 0,0006%. A massa molecular determinada por cromatografia em gel filtração (Bio Gel A 1.5m) foi de 199 kDa. Na caracterização cinética da enzima, encontramos maior catálise do substrato de pH 6,5 e a 60ºC. O valor da Km aparente foi de 0,23 mM e Vmax 0,25 unidades de absorbância para hidrólise do p-nitrofenil-N-acetil-ß-D-glucosaminídeo. A ß-N-acetilglucosaminidase foi inibida por HhCl2, Na2HPO4, AgNO3 e Na2H2PO4. Em testes de competitividae o fucoidan foi o único carboidrato que inibiu parcialmente a atividade enzimática (12,8%). |
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