Purificação e caracterização de uma ß-N-acetilhexosaminidade identificada em extratos protéicos de Palythoa caribaeorum /
No presente estudo, foram identificadas várias enzimas com atividade degradativa sobre substratos sintéticos (p-nitrofenis derivados de açúcar) em extratos protéicos de Palythoa caribaeorum. Uma dessas enzimas, a ß-N-acetilhexosaminidase foi purificada 4825,8 vezes através de precipitação com sulfat...
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| Formato: | Dissertação |
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| Resumo: | No presente estudo, foram identificadas várias enzimas com atividade degradativa sobre substratos sintéticos (p-nitrofenis derivados de açúcar) em extratos protéicos de Palythoa caribaeorum. Uma dessas enzimas, a ß-N-acetilhexosaminidase foi purificada 4825,8 vezes através de precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade em quitina, cromatografia de gel filtração em BioGel A 1.5m e cromatografia de gel filtração em BioGel A 0.5m. A recuperação final da enzima foi de 25%. A massa molecular da enzima foi estimado em 25 kDa quando determinada por eletroforese em gel de poliacrilamida SDS/PAGE. O pH ótimo foi 5.0 e o km aparente 0,45 e Vmax 0,147 unidades de absorbância para a hidrólise do p-nitrofenil-N-acetil-ß-D-glicosaminídeo. A enzima foi principalmente inibida por HgCl2, CaCl2 e iodoacetamida e principalmente por Na2SeO4, BaCl2, MgCl2, Na2S2O3. Em testes de competitividade, a maltose e o fucoidan foram os carboidratos que mais inibiram a atividade (em 36% e 18%, respectivamente). Por outra lado, o condroitim 6-sulfato e o condroitim 4-sulfato potencializaram a atividade enzimática em 35% e 19%, respectivamente. |
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