Purificação e caracterização parcial de uma B-N-Acetilglucosaminidase extraída do Molusco Strombus Goliath /
Resumo : O presente trabalho constitui-se da investigação da presença de enzimas com atividade sobre gliocosaminoglicanos e substratos sintéticos. Foi analisado o sistema enzimático presente na espécie Strombus Goliath. Tecidos do molusco foram homogeneizados a 4ºC com tampão acetato de sódio 0,1 M...
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| Formato: | Dissertação |
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| Resumo: | Resumo : O presente trabalho constitui-se da investigação da presença de enzimas com atividade sobre gliocosaminoglicanos e substratos sintéticos. Foi analisado o sistema enzimático presente na espécie Strombus Goliath. Tecidos do molusco foram homogeneizados a 4ºC com tampão acetato de sódio 0,1 M pH 5,0; centrifugados a 10.000 x ge o sobrenadante do submetido a fracionamento com concentrações crescentes de sulfato de amônio de 0-50% e 50-80% originando as frações F1 e F2, respectivamente. Estudos iniciais sugerem a presença de atividades glicosidásicas, entre elas a- e B-endoglicosidases. Após fracionamento em gel filtração Bio-gel A 1,5m, detectou-se uma enzima com atividade B-n-acetilglucosaminadásica e com massa molecular de 80kDa quando determinada em SDS-PAGE. Na determinação dos parâmetros cinéticos ideiais para B-N-acetilglucosaminadase, observou-se uma atividade ótima a pH 5,0 e temperatura de 50ºc; km de 0,75mM e Vmáx 139,07 de B-N-acetilglucosaminídeo liberado/ug de proteína/hora. A atividade de B-N-acetilglucosaminadase foi potencializada pelo fosfato de sódio dibásico, enquanto foi parcialmente inibida pelos sais - cloreto de magnésio, fosfato de sódio monobásico, cloreto de potássio e sulfato de cobre - e totalmente inibida por mercúrio. A enzima quando foi recromatografada por cormatografia líquida de alta precisão (HPLC) apresentou uma purtificação de 627 vezes com um rendimento de 0,16%. |
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