Isolamento e caracterização parcial de proteinases serínicas presentes no intestino médio de larvas de Mimosestes mimosae (Coleoptera : Bruchidae) /

Resumo: Em instestino médio de larvas de Mimosestes mimosae (coleoptera:Bruchidae) foram detectadas três tipos de atividades proteolíticas: hemoglobinásia a ph 3,0, azocaseinolitica a pH 5,5 e uma bapnásica a pH 7,5. O componente responsável pela atividade bapnásica a maior de todas as atividades de...

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Detalhes bibliográficos
Principais autores:	Pereira, Railene de Azevedo., Sales, Maurício Pereira de., Universidade Federal do Rio Grande do Norte.
Formato:	Dissertação
Publicado em:
Assuntos:	Bioquímica. Algaroba Pragas - Tripsina Serina proteinases Mimosestes mimosae - Besouro
Endereço do item:	https://app.bczm.ufrn.br/home/#/item/23766
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spelling	oai:localhost:123456789-140972022-11-29T14:58:26Z Isolamento e caracterização parcial de proteinases serínicas presentes no intestino médio de larvas de Mimosestes mimosae (Coleoptera : Bruchidae) / Pereira, Railene de Azevedo. Sales, Maurício Pereira de. Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Bioquímica. Algaroba Pragas - Tripsina Serina proteinases Mimosestes mimosae - Besouro Resumo: Em instestino médio de larvas de Mimosestes mimosae (coleoptera:Bruchidae) foram detectadas três tipos de atividades proteolíticas: hemoglobinásia a ph 3,0, azocaseinolitica a pH 5,5 e uma bapnásica a pH 7,5. O componente responsável pela atividade bapnásica a maior de todas as atividades detctadas, foi isolado e parcialmente caracterizado a partir do homogenato intestinal por cromatografia de afinidade em Arginia-Sepharose 4B, seguida por cromatografia de troca iônica em DEAE-Sephadex. A fração PD III, obtida da coluna de troca iônica, apresentou atividade ótima a pH 9,0 e temperatura de 50º C. A atividade bapnásica do homogenato intestinal e da fração PD III foi inibida parcialmente por PMSF ( inibidor de proteinase serínica) e completamente inibida por TLCK (inibidor de proteínase serínica semelhante a tripsina). OS inibidores TPCK (inibidor de proteinase serínica semelhante a quimotripsina), E-64 e iodocetamina (inibidor de proteinase cisteinica) EDTA e 1,10-fenantrolina (inibidor de metaloproteinase) e pepstatina A (inibidor de proteinase aspártica) não tiveram nehuma ação inibitória sobre esta atividade . A titulação da atividade bapnásica com inibidor TLCK, revelou que cerca de 9uM de enzima foram sensíveis a TLCK por miligrama de proteína e nesta concentração a atividade específica da enzima foi calculada como sendo 1566 UA/mg, sendo estimado que um intestino possue cerca de a,45 uM de enzima correspondente a 0,24uM E/Im . O Km e a Vmáx desta enzima tipo tripsina foram 2,2 x 10M e 0,18 unidades de absorbância a 405 nm/hora respctivamente. A massa molecular foi estimado em 29 kDA por SDS-PAGE e atividade em gel de poliacrilamina contendo azocaseína.#$&Abstract: In Mimosestes mimosae larvae midgut was detected three proteolytic activities an hemoglobinasic at pH 3.0, an azocaseinolytic at pH 5.5 and a bapnasic at pH 7.5. The compennet responsible for bapnasic activity (the major activity) was isolated from the gut homogete by inffinity chromatography on Arginine-Sepharose 4B followed by ion exchange chromotography on DEAE-Sephadex and characterized partialy. The PD III fraction, obtained by of ion exchange column, showed optimum activity at pH 9.0 and temperature of 50ºC. The bapnasic activity of gut homogenate and PD III fraction were partialy inhibited by PMSF (srine proteinase inhibitor) and inhibited completely by TLCK (trypsin-like serine proteinase inhibitor). The TPCK (quimitrypsin-like serine proteinase inhibitor); E-64 and iodocetamide (cysteine proteinase inhibitor); EDTA and 1,10-phenanthroline (metallo-proteinase inhibitor) and pepstatin A (aspartic proteinase inhibitor) didn´t inhibitor this activity. Titration of bapnasic activity with TLCK, showed that exists 9 uM/mg TLCK-sensitive enzyme with specific activity of 1566 UA/mg and determined how much of enzyme to exists by midgut:0,045 uM E/IM corresponding 0,24 ug E/IM Km and Vmáx trypsin-like enzyme were 2,2x10 M and 0,18 absorbance units the 405 nm/hours. The aparent molucular mas was stimated in 29 kDA by SDS-PAGE and azocaseinolitic activity in SDS polyacrilamide gel 2 2022-10-05T09:28:26Z 2022-10-05T09:28:26Z 2000. Dissertação 577.1 P436i DISSERT 23766 https://app.bczm.ufrn.br/home/#/item/23766 https://app.bczm.ufrn.br/home/#/item/23766
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description	Resumo: Em instestino médio de larvas de Mimosestes mimosae (coleoptera:Bruchidae) foram detectadas três tipos de atividades proteolíticas: hemoglobinásia a ph 3,0, azocaseinolitica a pH 5,5 e uma bapnásica a pH 7,5. O componente responsável pela atividade bapnásica a maior de todas as atividades detctadas, foi isolado e parcialmente caracterizado a partir do homogenato intestinal por cromatografia de afinidade em Arginia-Sepharose 4B, seguida por cromatografia de troca iônica em DEAE-Sephadex. A fração PD III, obtida da coluna de troca iônica, apresentou atividade ótima a pH 9,0 e temperatura de 50º C. A atividade bapnásica do homogenato intestinal e da fração PD III foi inibida parcialmente por PMSF ( inibidor de proteinase serínica) e completamente inibida por TLCK (inibidor de proteínase serínica semelhante a tripsina). OS inibidores TPCK (inibidor de proteinase serínica semelhante a quimotripsina), E-64 e iodocetamina (inibidor de proteinase cisteinica) EDTA e 1,10-fenantrolina (inibidor de metaloproteinase) e pepstatina A (inibidor de proteinase aspártica) não tiveram nehuma ação inibitória sobre esta atividade . A titulação da atividade bapnásica com inibidor TLCK, revelou que cerca de 9uM de enzima foram sensíveis a TLCK por miligrama de proteína e nesta concentração a atividade específica da enzima foi calculada como sendo 1566 UA/mg, sendo estimado que um intestino possue cerca de a,45 uM de enzima correspondente a 0,24uM E/Im . O Km e a Vmáx desta enzima tipo tripsina foram 2,2 x 10M e 0,18 unidades de absorbância a 405 nm/hora respctivamente. A massa molecular foi estimado em 29 kDA por SDS-PAGE e atividade em gel de poliacrilamina contendo azocaseína.#$&Abstract: In Mimosestes mimosae larvae midgut was detected three proteolytic activities an hemoglobinasic at pH 3.0, an azocaseinolytic at pH 5.5 and a bapnasic at pH 7.5. The compennet responsible for bapnasic activity (the major activity) was isolated from the gut homogete by inffinity chromatography on Arginine-Sepharose 4B followed by ion exchange chromotography on DEAE-Sephadex and characterized partialy. The PD III fraction, obtained by of ion exchange column, showed optimum activity at pH 9.0 and temperature of 50ºC. The bapnasic activity of gut homogenate and PD III fraction were partialy inhibited by PMSF (srine proteinase inhibitor) and inhibited completely by TLCK (trypsin-like serine proteinase inhibitor). The TPCK (quimitrypsin-like serine proteinase inhibitor); E-64 and iodocetamide (cysteine proteinase inhibitor); EDTA and 1,10-phenanthroline (metallo-proteinase inhibitor) and pepstatin A (aspartic proteinase inhibitor) didn´t inhibitor this activity. Titration of bapnasic activity with TLCK, showed that exists 9 uM/mg TLCK-sensitive enzyme with specific activity of 1566 UA/mg and determined how much of enzyme to exists by midgut:0,045 uM E/IM corresponding 0,24 ug E/IM Km and Vmáx trypsin-like enzyme were 2,2x10 M and 0,18 absorbance units the 405 nm/hours. The aparent molucular mas was stimated in 29 kDA by SDS-PAGE and azocaseinolitic activity in SDS polyacrilamide gel
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